The expression of matrix metalloproteinase-13 (MMP-13) on xenograft and PRF in bone regeneration / Efeito da combinação de xenoenxerto e PRP na expressão de metaloproteinase de matriz -13 (MMP-13) durante regeneração óssea

Objective: inflammation may play a role in bone loss by altering the boné remodelling process, favouring bone resorption by osteoclasts over bone synthesis by osteoblasts. Matrix metalloproteinase 13 (MMP-13) has the ability to activate osteoclasts, leading to bone resorption. Regenerative treatments have been widely used in periodontology. When combined with Platelet-rich fibrin (PRF), xenografts will give better results in bone regeneration. The aim of this study was to evaluate the effect of xenograft combined with PRF on MMP-13 expression in a bone defect using an experimentally created bone defect. Material and Methods: eighteen New Zealand rabbits were assigned to three groups. Each group consisted of six New Zealand rabbits. A critical bone defect with a diameter size of 5 mm was created in the right tibia of each rabbit in group 1 (application: xenograft), group 2 (application: PRF), and group 3 (application: xenograft and PRF). The PRF was produced from 5 ml of blood taken from each rabbit's ears. After 30 days, the rabbits were euthanized. The tissue samples were evaluated by immunohistochemical staining. Results: group 3 showed the lowest mean expression of MMP-13 (4.50) compared to group 1 (20.50) and group 2 (11.70). Group 3 showed a significant difference in the MMP-13 expression compared to group 1 and group 2 (P = 0.000) (P < 0.05). Conclusion: this research showed that the combination of xenograft and PRF had the lowest expression of MMP-13. The application of a xenograft and PRF has better osteogenesis ability in bone regeneration.(AU)

Objetivo: inflamação pode interferir na perda óssea através de alterações no processo de remodelação, favorecendo a reabsorção óssea pelos osteoclastos ao invés da síntese pelos osteoblastos. A metaloproteinases de matriz 13 (MMP-13) ativa osteoclastos causando reabsorção óssea. Tratamentos regenerativos têm sido amplamente usados na periodontia. Quando combinamos Plasma rico em plaquetas (PRP) e xenoenxerto levam a melhores resultados de regeneração óssea. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de xenoenxerto combinado com PRP na expressão de MMP-13 em defeitos ósseos experimentais. Material e Métodos: dezoitos coelhos Nova Zelândia foram distribuídos em 3 grupos de 6 coelhos cada. Um defeito ósseo de 5 mm de diâmetro foi feito na tíbia direita dos animais do grupo 1 (xenoenxerto), grupo 2 (PRP) e grupo 3 (Xenoenxerto+PRP). O PRP foi obtido pela coleta de 5mL de sangue das orelhas dos coelhos. Após 30 dias, os coelhos foram eutanasiados. As amostras foram submetidas a coloração imuno-histoquímica. Resultados: o grupo 3 apresentou a menor expressão de MMP-13 (4.50) quando comparado ao grupo 1 (20.50) e ao grupo 2 (11.70). O grupo 3 mostrou diferença estatística significante em relação a expressão de MMP-13 quando comparado aos grupos 1 e 2 (p=0.000) (p< 0.05). Conclusão: esta pesquisa mostra que a combinação de xenoenxerto e PRP teve a menor expressão de MMP-13. A combinação de xenoenxerto e PRP têm maior habilidade de osteogênese na regeneração óssea (AU)

Hematological Changes after Caprine Demineralized Bone Matrix Implantation in Ulnar Critical Defect of Rabbit Model / Alterações hematológicas após implante de matriz óssea desmineralizada caprina em modelo de defeito ulnar crítico em coelhos

Abstract Objective Several animal models have been used in fracture healing and bone graft studies, but hematological responses are seldom reported. Therefore, the present study reported the hematological changes observed in rabbits that underwent xenografting of caprine demineralized bone matrix (CDBM). Method Twenty-four (24) male rabbits (2.5 0.5kg) were acquired for the purpose of this study and were randomly assigned to three groups: autologous bone graft (ABG), unfilled (NC), and caprine demineralized bone matrix (CDBM). Blood samples were collected through cardiac puncture under xylazine-ketamine anesthesia on day 0 (baseline), and on days 28 and 56 postsurgery and were analyzed manually within 2hours of collection. Statistical analysis was performed using a two-way analysis of variance (ANOVA) with repeated measures, and a p-value< 0.05 was considered significant. Result There was an overall significant difference in the values of total white blood cell count (p» 0.0043), neutrophil count (p< 0.0001), monocyte count (p» 0.0184), red blood cell count (p» 0.003), hemoglobin concentration (p< 0.0001) and packed cell volume (p< 0.0001) across the days and the treatment groups. There was, however, no overall significant difference in lymphocyte count (p» 0.4923), basophil count (p» 0.4183), and eosinophil count (0.4806) within days. Conclusion Response to CDBM grafting in rabbits could, therefore, be said to be characterized by marked leukocytosis with neutrophilia, lymphocytosis, and monocytosis by day 28 of postgrafting. This could form the basis with which hematology can be used to monitor body response of bone graft animal models.

Resumo Objetivo Diversos modelos animais têm sido usados em estudos sobre enxertos ósseos e o tratamento de fraturas, mas as respostas hematológicas são raramente relatadas. Este estudo descreveu as alterações hematológicas observadas em coelhos submetidos a xenoenxertos de matriz óssea desmineralizada caprina (MODC). Métodos Vinte e quatro (24) coelhos machos (2,5 0,5 kg) foram adquiridos para este estudo e divididos aleatoriamente em três grupos: enxerto ósseo autólogo (EOA); controle negativo sem preenchimento (SP) e matriz óssea desmineralizada caprina (MODC). Amostras de sangue foram coletadas por punção cardíaca sob anestesia com xilazina-quetamina no dia 0 (para estabelecimento dos valores basais) e aos dias 28 e 56 após a cirurgia; essas amostras foram submetidas à análise manual em até 2 horas após a coleta. A análise estatística foi composta por análise de variância (ANOVA) de dois fatores com medidas repetidas, e o valor de p< 0,05 foi considerado significativo. Resultados Houve uma diferença geral significativa nos números de leucócitos totais (p» 0,0043), neutrófilos (p< 0,0001), monócitos (p» 0,0184) e hemácias (p» 0,003), na concentração de hemoglobina (p< 0,0001) e no hematócrito (p< 0,0001) ao longo dos dias e entre os grupos de tratamento. No entanto, não houve diferença global significativa no número de linfócitos (p» 0,4923), basófilos (p» 0,4183) e eosinófilos (p» 0,4806) entre os dias. Conclusão A resposta ao enxerto de MODC em coelhos é, portanto, caracterizada por leucocitose intensa com neutrofilia, linfocitose e monocitose no 28° dia após o procedimento. Esses dados podem basear a utilização da hematologia no monitoramento da resposta corporal em modelos animais de enxerto ósseo.

Estudio histológico y radiográfico de la preservación alveolar post-exodoncia con sulfato de calcio y xenoinjerto en cobayos / Estudo histológico e radiográfico da preservação alveolar pós-extracção com sulfato de cálcio e xenoinjerto em cobaias / Histological and radiographical study of the alveolar post-extractionpreservation with calcium sulfate and xenoinjerto in guinea pigs

Después de realizar una exodoncia inicia un proceso de remodelación ósea, dejando como consecuencia un volumen óseo disminuido que puede impedir la colocación de un implante dental en óptimas condiciones. Objetivo: Evaluar la preser-vación alveolar post-exodoncia utilizando sulfato de calcio oxenoinjerto en cobayos en comparación con la cicatrización espontánea. Materiales y Métodos: Se utilizaron 30 cobayos machos, de cuatro meses de edad, asignados en tres grupos de 10 cobayos cada uno: G1 Sulfato de calcio, G2 Xenoinjerto (bovino) G3 control negativo (sin sustituto óseo). Se realizó la exodoncia del incisivo central inferior derecho se cureteó y lavó con suero fisiológico, el grupo G1 y G2 se rellenaron con el biomaterial correspondiente, el grupo G3 no recibió ningún biomaterial. La sutura fue punto en X con Vicryl (4/0). Se tomó radiografías estandarizadas en el pos operatorio inmediato y a los 40 dias,se medió la cresta alveolar en mesial, distal y coronal. A los 40 días los cobayos fueron sacrificados, obteniendo el segmento de hueso alveolar para el análisis histológico del alvéolo. Los datos fueron analizados mediante el test de Kruskal Wallis y chi cuadrado con un nivel de significancia del 5%. Resultados: Fue observada la preservación de la cresta alveolar en mesial 2,92 (p= 0,025) y cervical 0,92 (p=0,043). En el análisis histológico los espacios en la región fibrosa en la parte media del alvéolo fue 26,00 para el sulfato de calcio y 23,80 para el xenoinjerto (p = 0,011), en apical 16,20para el sulfato de calcio y 20,60para el xenoinjerto (p= 0,020), espacios vacíos en coronal (p= 0,003), tejido fibroso (p=0,010), regeneración ósea (p= 0,019), áreas hialinas (p= 0,010).Conclusión: Se preservan mejor los alvéolos postextracción usando Sulfato de Calcio y Xenoinjerto en compa-ración con la cicatrización espontánea en cobayos.

After performing an extraction, a process of bone remodeling begins, leaving as a consequence a decreased osseous volume that can prevent the placement of a dental implant in optimal conditions. Objective: To evaluate post-exodontia alveolar preservation using calcium sulfate or xenograft in guinea pigs compared to spontaneous healing. Materials and Methods:30 male guinea pigs, four months old, assigned in three groups of 10 guinea pigs each were used: G1 Calcium sulphate, G2 Xenograft (bovine) G3 Negative control (without bone substitute). Exodontia of the lower right central incisor was curetted and washed with physiological serum, group G1 and G2 were filled with the corresponding biomaterial, group G3 did not receive any biomaterial. The suture was point in X with Vicryl (4/0). Standardized radiographs were taken in the imme-diate postoperative period and after 40 days, the alveolar crest was measured mesially, distally and coronally. At 40 days the guinea pigs were sacrificed, obtaining the segment of alveolar bone for the histological analysis of the alveolus. The data were analyzed through of the Kruskal Wallis test and chi square test with a level of significance of 5%. Results: The preservation of the alveolar crest was observed in mesial 2.92 (p = 0.025) and cervical 0.92 (p = 0.043). In the histological analysis, the spaces in the fibrous region in the middle part of the alveolus were 26.00 for calcium sulphate and 23.80 for xenograft (p = 0.011), apical 16.20 for calcium sulphate and 20 , 60 for the xenograft (p = 0.020), empty coronal spaces (p = 0.003), fibrous tissue (p = 0.010), bone regeneration (p = 0.019), hyaline areas (p = 0.010). Conclusion: Post-extraction alveoli are better preserved using Calcium Sulphate and Xenograft compared to spontaneous wound healing in guinea pigs.

Após a realização de uma extração, inicia-se um processo de remodelação óssea, deixando como conseqüência um volume ósseo diminuído que pode impedir a colocação de um implante dentário em condições ótimas. Objetivo: Avaliar a preservação alveolar pós- pós extração com sulfato de cálcio ou xenoenxerto em cobaias em comparação com a cicatrização espontânea. Materiais e Métodos: Foram utilizadas 30 cobaias machos de quatro meses de idade, distribuídos em três grupos de 10 cobaias cada. G1 Sulfato de cálcio, G2 Xenoenxerto (bovino) G3 Controle negativo (sem substituto ósseo). A exodontia do incisivo central inferior direito foi curetada e lavada com soro fisiológico, o grupo G1 e G2 foram preenchidos com o biomaterial correspondente, o grupo G3 não recebeu nenhum biomaterial. A sutura foi ponto em X com Vicryl (4/0). Radiografias padronizadas foram realizadas no pós-operatório imediato e, após 40 dias, a crista alveolar foi medida mesial, distal e coronária. Aos 40 dias as cobaias foram sacrificadas, obtendo-se o segmento de osso alveolar para a análise histológica do alvéolo. Os dados foram analisados por meio do teste de Kruskal Wallis e teste do qui-quadrado com nível de significância de 5%. Resultados: A preservação da crista alveolar foi observada em mesial 2,92 (p = 0,025) e cervical 0,92 (p = 0,043). espaços análise histológica da região fibroso no meio do alvéolo foi 26,00 para o sulfato de cálcio e de 23,80 para o xenoenxerto (p = 0,011), em apical 16,20 para o sulfato de cálcio e 20 , 60 para o xenoenxerto (p = 0,020), em espaços vazios coronal (p = 0,003), o tecido fibroso (p = 0,010), a regeneração óssea (p = 0,019), as áreas hialinas (p = 0,010). Conclusão: Os alvéolos pós-extração são melhor preservados usando Sulfato de Cálcio e Xenoenxerto em comparação com a cicatrização espontânea em cobaias.

Atividade anticarcinogênica da tributirina associada ou não ao sorafenibe em ratos Fischer-344 implantados com células GP7TB / Evaluation of anticarcinogenic activity associated or not with sorafenib in Fischer-344 rats implanted with GP7TB cells

O câncer primário de fígado (CPF) apresenta mau prognóstico, o que torna importante sua quimioprevenção. Nesse sentido, a tributirina (TB), um pró-fármaco do ácido butírico (AB), presente em laticínios e no mel, mostrou-se um agente quimiopreventivo promissor da hepatocarcinogênese experimental. Os efeitos inibitórios da TB têm sido relacionados à inibição do desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas, bem como indução de apoptose e hiperacetilação de histonas. A quimioterapia é uma das abordagens mais comuns para o tratamento de diversos tipos de câncer, inclusive o CPF. Neste caso, o tratamento com sorafenibe (SO) é capaz de prolongar a sobrevida média dos pacientes com a doença em fases avançadas em aproximadamente apenas três meses. Em vista disso, são necessários estudos da associação do sorafenibe com outros compostos que possam aumentar a eficácia do tratamento quimioterápico. Desta forma, a associação de fármacos anti-neoplásicos com compostos bioativos dos alimentos pode consistir em uma estratégia potencial para aumentar a eficácia contra o câncer. No presente estudo, foi avaliada a atividade anticarcinogênica da TB e do SO, isoladamente ou em associação, na etapa de progressão da hepatocarcinogênese. Para tanto, foram realizados implantes singênicos no flanco de ratos Fischer-344 a partir de células da linhagem tumoral GP7TB. Quando as neoplasias atingiram 1 cm3, os animais foram aleatorizados em grupos experimentais: Grupo controle (CO), constituído por 10 ratos Fischer 344 que receberam Maltodextrina (300mg/ 100 g. p. c.), controle isocolarico e solução de etanol à 12,5% e Cremofor à 12,5% em agua estéril; Grupo Tributirina (TB), constituído por 9 ratos Fischer 344 que receberam TB (200mg/ 100 g. p. c.) e solução de etanol à 12,5% e Cremofor à 12,5% em água estéril; Grupo sorafenibe (SO) constituído por 9 ratos Fischer 344 que receberam Maltodextrina (300 mg/ 100 g. p. c.), controle isocalorico e tosilato de sorafenibe (3mg / 100 g. p. c. ) em água estéril; Grupo associação da tributirina com o sorafenibe (AS) constituído por 9 ratos Fischer 344 que receberam TB (20 mg/ 100 g. p. c.) e tosiliato de sorafenibe (3mg/ 100 g. p. c.); tratados por administração intragástrica (i.g) diariamente por 5 semanas consecutivas. As concentrações de AB e SO foram analisadas por cromatografia gasosa associada à espectrometria de massa e as neoplasias foram caracterizadas por imunoistoquímica. Em relação à evolução do tamanho das neoplasias o grupo AS apresentou menor (p=0,009) tamanho das mesmas em relação ao grupo CO. No entanto, estas diferenças não atingiram diferenças significativas (p>0,05) entre os grupos TB e CO, bem como entre os grupos SO e CO. Contudo, quando ajustados os valores do tamanho da neoplasia pela latência, observou-se alterações significativas (p<0,05) nos diversos grupos quando comparados ao grupo CO. O grupo SO aumentou a área necrótica das neoplasias, embora esta diferença não tenha atingido diferença significativa (p>0,05), enquanto que o grupo TB reduziu essa área necrótica em relação ao grupo CO (p=0,005). O grupo TB e AS apresentaram significativamente maiores (p<0,05) concentrações hepáticas e neoplásicas de AB em relação ao grupo CO. O grupo SO e AS apresentaram significativamente maiores (p<0,05) concentrações neoplásicas de SO em relação ao grupo CO. Os grupos SO e AS reduziram a expressão de PTEN, quando comparados ao grupo CO, embora esta diferença não tenha atingido diferença significativa (p>0,05). O grupo TB por sua vez expressou maiores niveis de PTEN, embora esta diferença não tenha atigindo significância estatística (p>0,05). Todos os grupos expressaram maiores niveis de caspase 3 clivada quando comparada ao grupo CO (p>0,05). OS grupos TB e SO reduziram a expressão de pERK ½ quando comparados ao grupo CO. embora estas diferenças não tenham atingidos diferença estatística (p>0,05). O grupo AS apresentou maior expressão de pERK ½ quando comparada ao grupo CO, embora esta diferença não tenha atingido diferença significativa (p>0,05). A caracterização das neoplasias do grupo CO foi padronizada por imunoistoquímica, apresentando-se positivas para CK 7, CK8, CK19 e Arginase e negativas para HepPar1 e CK18. Assim, os resultados sugerem que as neoplasias obtidas por implantes com células da linhagem GP7TB apresentam características de CPF oriundo de células tronco neoplásicas. Além disso, os grupos experimentais TB e AS apresentaram atividade anticarcinogênica promissora no modelo de implantes singênicos com células GP7TB, que eventualmente envolvem mecanismos de ação distintos da atividade quimioterápica apresentada pelo SO

Primary liver cancer (PLC) presents poor prognosis, which makes its chemoprevention important. In this sense, tributyrin (TB), a prodrug of butyric acid (AB), present in dairy products and honey, has been shown to be a promising chemopreventive agent for experimental hepatocarcinogenesis. The inhibitory effects of TB have been related to inhibition of the development of pre-neoplastic lesions, as well as induction of apoptosis and hyperacetylation of histones. Chemotherapy is one of the most common approaches for treating various types of cancer, including PLC. In this case, treatment with sorafenib (SO) is able to prolong the average survival of patients with the disease in advanced stages in approximately three months. In view of this, studies of the association of sorafenib with other compounds that may increase the efficacy of chemotherapeutic treatment are necessary. Thus, the association of anti-neoplastic drugs with bioactive compounds in food may be a potential strategy to increase efficacy against cancer. In the present study, the anticarcinogenic activity of TB and SO was evaluated, alone or in combination, in the progression stage of hepatocarcinogenesis. For this purpose, syngenic implants were performed on the flank of Fischer-344 mice from GP7TB tumor cells. When the neoplasms reached 1 cm3, the animals were randomized into experimental groups: Control group (CO), consisting of 10 Fischer 344 rats receiving Maltodextrin (300mg / 100 g.p.c), isocaloric control and 12.5% ethanol solution, and Cremofor to 12.5% in sterile water; Tributyrin group (TB), consisting of 9 Fischer 344 rats that received TB (200mg / 100 g.p.c.) and 12.5% ethanol solution and Cremofor 12.5% in sterile water; Sorafenib group (SO) consisting of 9 Fischer 344 rats receiving maltodextrin (300 mg / 100 g, w / w), isocaloric control and sorafenib tosylate (3 mg / 100 g, w / w) in sterile water; The association group of tributyrin and sorafenib (AS) consisted of 9 Fischer 344 rats receiving TB (20 mg / 100 g p.o.) and sorafenib tosylate (3 mg / 100 g p.o.); treated intragastric (i.g) daily for 5 consecutive weeks. The concentrations of AB and SO were analyzed by gas chromatography associated with mass spectrometry and the neoplasms were characterized by immunohistochemistry. In relation to the evolution of the size of the neoplasias, the AS group presented smaller (p = 0.009) size of the same ones in relation to the CO group. However, these differences did not reach significant differences (p> 0.05) between the TB and CO groups, as well as between the SO and CO groups. However, when adjusted for size of the neoplasm by latency, significant changes (p <0.05) were observed in the different groups when compared to the CO group. The SO group increased the necrotic area of the neoplasias, although this difference did not reach a significant difference (p> 0.05), while the TB group reduced this necrotic area in relation to the CO group (p = 0.005). The TB and AS groups presented significantly higher (p <0.05) hepatic and neoplastic AB concentrations than the CO group. The SO and AS groups presented significantly higher (p <0.05) neoplastic concentrations of SO in relation to the CO group. The SO and AS groups reduced the PTEN expression when compared to the CO group, although this difference did not reach a significant difference (p> 0.05). The TB group in turn expressed higher levels of PTEN, although this difference did not increase statistical significance (p> 0.05). All groups expressed higher levels of caspase 3 cleaved when compared to the CO group (p> 0.05). The TB and SO groups reduced the expression of pERK ½ when compared to the CO group. although these differences did not reach statistical difference (p> 0.05). The AS group presented higher pERK ½ expression when compared to the CO group, although this difference did not reach a significant difference (p> 0.05). Characterization of the neoplasias of the CO group was standardized by immunohistochemistry, presenting positive for CK 7, CK8, CK19 and Arginase and negative for HepPar1 and CK18. Thus, the results suggest that the neoplasias obtained by implants with GP7TB cells present CPF characteristics originating from neoplastic stem cells. In addition, the experimental groups TB and AS presented promising anticarcinogenic activity in the model of syngeneic implants with GP7TB cells, which eventually involve mechanisms of action distinct from the chemotherapy activity presented by SO

Desenvolvimento de xenotransplantes de tumores pancreáticos humanos para varredura genética de alvos moleculares com potencial terapêutico / Establishment of xenografts from human pancreatic tumors for genetic screening of molecular targets with therapeutic potential

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC, pancreatic ductal adenocarcinoma), o tipo mais prevalente de câncer do pâncreas, é uma neoplasia extremamente agressiva e com elevado índice de letalidade. Há uma necessidade premente de identificação de vulnerabilidades no PDAC que possam ser exploradas como alvos terapêuticos, e a utilização de modelos pré-clínicos que recapitulem a complexidade biológica e heterogeneidade clínica da doença é um aspecto central para a realização dessa tarefa. Os xenotransplantes de tecido tumoral derivado de pacientes (PDX, patient-derived tumor tissue xenografts), realizados em camundongos imunodeficientes, replicam com grande similaridade as principais características do tumor original e, assim, constituem uma ferramenta valiosa para o teste de drogas e estudos funcionais. Neste trabalho, 17 amostras cirúrgicas de PDAC humano foram implantadas subcutaneamente em camundongos nude atímicos. Sete tumores (41%) foram enxertados com sucesso e têm sido mantidos em sucessivas gerações de animais receptores. O exame histológico de seis desses xenoenxertos identificou características morfológicas compatíveis com os padrões reconhecidos no PDAC humano, assim como uma consistente similaridade de seu status de diferenciação histológica em relação aos perfis verificados nos tumoresoriginais. O cultivo in vitro de células derivadas de um dos xenotumores resultou em uma nova linhagem de câncer de pâncreas, com morfologia e cinética de crescimento comparáveis às de outras linhagens celulares de câncer pancreático. O potencial tumorigênico dessa nova linhagem foi validado in vivo, com uma consistente formação de tumores após inoculação em camundongos nude. A fim de aproveitar esse recurso para a investigação de potenciais alvos terapêuticos no PDAC, um rastreamento de vulnerabilidades moleculares foi realizado por meio de silenciamento gênico em larga-escala com RNA de interferência (RNAi). Uma biblioteca lentiviral de 4492 shRNAs (short hairpin RNAs), alvejando cerca de 350 genes envolvidos na regulação epigenética, foi empregada para a triagem de genes de suscetibilidade nas células derivadas de PDX, e em outras cinco linhagens tumorais pancreáticas (AsPC-1, BxPC-3, Capan-1, MIA PaCa-2 e PANC-1). Inicialmente, foi realizada uma série de experimentos preliminares, visando à amplificação e controle de qualidade da biblioteca de silenciamento, à produção de vetores lentivirais e à padronização das condições experimentais para a transdução e seleção das células-alvo. Apenas três das linhagens avaliadas (AsPC-1, MIA PaCa-2 e PANC-1) mostraram-se permissíveis à transdução pelos vetores lentivirais, e foram assim utilizadas no screening de alvos epigenéticos. A análise dos dados obtidos nesse ensaio está em curso e os resultados serão utilizados para a definição de potenciais alvos candidatos. Em conclusão, recursos valiosos para apoiar a pesquisa sobre o câncer de pâncreas foram desenvolvidos. A coleção de PDXs estabelecida, bem como a linhagem celular recém-derivada, constituem uma fonte permanente e estável de células de PDAC para análises moleculares e estudos funcionais que busquem elucidar aspectos da doença ainda pouco compreendidos. Adicionalmente, os reagentes gerados e a expertise adquirida com os ensaiosrealizados com a biblioteca de shRNAs contra alvos epigenéticos serão de grande utilidade em futuras investigações para identificar genes com funções importantes na manutenção do fenótipo tumoral, e consequentemente com potencial para serem explorados terapeuticamente

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), the most prevalent type of pancreatic cancer, is a highly aggressive and lethal neoplasm. There is a pressing need to identify vulnerabilities in PDAC suited to be exploited as therapeutic targets, and the use of preclinical models recapitulating the biological complexity and clinical heterogeneity of the disease is central to this task. Patient-derived tumor tissue xenografts (PDX), established in immunodeficient mice, replicate with great similarity the main characteristics of the original tumor and thus constitute a valuable tool for drug testing and functional studies. In this work, 17 surgical samples of human PDAC were implanted subcutaneously in athymic nude mice. Seven tumors (41%) were successfully grafted and have been maintained through successive generations of recipient animals. Histological examination of six of these xenografts identified morphological characteristics compatible with the recognized patterns of human PDAC, as well as a consistent similarity of their histological differentiation status in relation to the profiles verified in the original tumors. In vitro culture of cells derived from one of these xenografts resulted in a new pancreatic cancer cell line, with morphology and growth kinetics comparable to those of other pancreatic tumor cells. The tumorigenic potential of this freshly derived cell line was validated in vivo, with a consistent tumor formation following inoculation into nude mice. To take advantage ofthis resource to investigate potential therapeutic targets in PDAC, a screening of molecular vulnerabilities was performed through large-scale gene silencing with RNA interference (RNAi). A lentiviral library containing 4492 short hairpin RNAs (shRNAs), targeting about 350 genes involved in epigenetic regulation, was employed for the search of susceptibility genes in the PDX-derived cells and in other five pancreatic tumor cell lines (AsPC-1, BxPC -3, Capan-1, MIA PaCa-2 and PANC-1). Initially, a series of preliminary experiments were carried out aiming at the amplification and quality control of the silencing library, production of lentiviral vectors and adjustment of the experimental conditions for transduction and selection of the target cells. Only three of the cell lines evaluated (AsPC-1, MIA PaCa-2 and PANC-1) were permissible for transduction by the lentiviral vectors, and were accordingly used in the screening of epigenetic targets. The analysis of data obtained in this trial is ongoing and the results will be used for definition of potential candidate targets. In conclusion, valuable resources to support research on pancreatic cancer have been developed. The established collection of PDXs as well as the newly derived cell line constitutes a permanent and stable source of PDAC cells for molecular analyzes and functional studies seeking to elucidate aspects of this disease that are still poorly understood. Additionally, both the reagents generated and the expertise gained from the RNAi assay against epigenetic targets will have inordinate usefulness in future investigations to identify genes with major functions in maintaining the malignant phenotype, and consequently with the potential to be exploited therapeutically

Avaliação morfofuncional do enxerto de túnica albugínea suína na cistoplastia em ratos / Morpho-fuctional evaluation of porcine tunica albuginea as a graft for cystoplasty in rats

O objetivo deste trabalho é avaliar o uso da túnica albugínea suína na cistoplastia em ratos, avaliando funcionalidade, capacidade de reparação do órgão e possibilidades de complicações. Foram selecionados 30 ratos Wistar, machos, de seis meses de idade, divididos em: um grupo teste (TA), em que os animais receberam o enxerto de túnica albugínea suína após a cistectomia parcial e um grupo controle (C), em que os animais sofreram somente a cistectomia parcial. Os animais pertencentes a ambos os grupos foram divididos igualmente em subgrupos de cinco animais cada, que sofreram eutanásia em sete, 28 e 42 dias de pós-operatório. Foi realizada uma análise macroscópica e, posteriormente, uma análise histopatológica da região da ferida cirúrgica. Aos sete e 28 dias, os animais pertencentes ao grupo C e ao grupo TA apresentaram urotelização, regeneração da lâmina própria e da musculatura, porém o grupo TA apresentou menores sinais inflamatórios e maior organização tecidual, principalmente com relação à formação das fibras musculares. Aos 42 dias de pós-operatório, ambos os grupos já apresentavam características histológicas normais. Concluiu-se que o enxerto de túnica albugínea suína obteve sucesso na regeneração da bexiga de ratos, mantendo a funcionalidade do órgão, sem rejeição, e favorecendo a migração celular.(AU)

The aim of this study is to evaluate porcine tunica albuginea as a graft for cystoplasty in rats, regarding bladder function, capacity and possible complications. 30 male Wistar rats with six monthes of age have been selected and separated into two different groups: A test group (TA) in which the animals received a tunica albuginea graft after partial cystectomy and a control group (C) in which partial cystectomy was performed, followed by bladder suture. In each group the animals were euthanized at seven, 28 and 42 days after surgery. Macroscopic and Histological analysis have been performed. At seven and 28 days after surgery the samples from both groups had urothelial lining upon a lamina propria and smooth muscle fibers in regeneration process. However, the TA group showed less inflammatory signs and more organized structure, mainly regarding the smooth muscle formation. At 42 days after surgery all groups showed a bladder wall structure qualitatively identical to the normal tissue. We could conclude that tunica albuginea graft is able to maintain bladder function and support cellular migration without any kind of rejection.(AU)

Estudo comparativo de artrodese subtalar após fratura de calcâneo com enxerto ósseo ou xenoenxerto liofilizado / Comparative study of subtalar arthrodesis after calcaneal fracture with autologous bone graft or freeze-dried xenograft

Introdução: A fratura viciosamente consolidada do calcâneo pode evoluir com artrose e deformidades graves do pé. O objetivo deste estudo é identifi car diferenças na consolidação da artrodese subtalar corretiva, com interposição de enxerto ósseo tricortical autólogo ou com xenoenxerto bovino liofi lizado. Métodos: Foram avaliados prospectivamente 12 pacientes submetidos a artrodese subtalar no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Em 6 pacientes utilizou-se enxerto autólogo e em 6, xenoenxerto bovino liofilizado. Após seguimento médio de 58 semanas, realizou-se a avaliação dos pacientes utilizando a escala AOFAS e a escala visual analógica de dor (VAD). Dois avaliadores cegos avaliaram o tempo para a consolidação da artrodese e a integração do enxerto por exames radiográficos. Resultado: O escore AOFAS melhorou entre o pré e pós-operatório, média de 37 para 64 pontos (p=0,02) no grupo controle e de 38 para 74 pontos (p=0,02) no grupo estudo. Assim como a escala VAD melhorou, média de 4,7 para 1,9 (p=0,028) no grupo controle e de 5,5 para 2,7 (p=0,046) no grupo estudo. Houve consolidação da artrodese em todos os casos do grupo controle em um tempo médio de 5,3 semanas e em 5 casos do grupo estudo, em 8,8 semanas (p=0,077). A integração do enxerto ocorreu após uma média de 10,7 semanas e de 28,8 semanas no grupo controle e estudo, respectivamente (p=0,016). Conclusão: Não observamos diferença estatisticamente significativa no tempo para consolidação da artrodese entre os grupos, embora o tempo para integração do xenoenxerto bovino liofilizado seja estatisticamente maior. Houve melhora clínico-funcional em ambos os grupos.

Introduction: Viciously consolidated fracture of the calcaneus can evolve with osteoarthritis and severe foot deformities. The aim of this study is to identify differences in the consolidation of corrective subtalar arthrodesis with interposition of autologous tricortical bone graft or lyophilized bovine xenograft. Methods: We prospectively evaluated 12 patients undergoing subtalar arthrodesis in the Hospital de Clínicas of Porto Alegre. In 6 patients we used autologous graft and in other 6 lyophilized bovine xenograft. After a mean follow-up of 58 weeks, patients were evaluated using the AOFAS scale and a visual analogue pain scale (VAPS). Two blinded evaluators assessed the time for consolidation of the arthrodesis and integration of the graft for radiographic examinations. Result: The AOFAS score improved between the pre- and postoperative periods, a mean of 37 to 64 points (p = 0.02) in the control group and 38 to 74 points (p = 0.02) in the experimental group. VAPS scores improved as well, from a mean of 4.7 to 1.9 (p = 0.028) in the control group and 5.5 to 2.7 (p = 0.046) in the experimental group. There was consolidation of arthrodesis in all of the cases in the control group at a median time of 5.3 weeks, and in 5 cases in the experimental group, at 8.8 weeks (p = 0.077). Graft integration occurred after a mean of 10.7 weeks and 28.8 weeks in the control and experimental groups, respectively (p = 0.016). Conclusion: We did not fi nd a statistically signifi cant difference in the time for arthrodesis consolidation between the groups, although the time for integration of the lyophilized bovine xenograft is statistically higher. There was clinical and functional improvement in both groups.

Bio-Oss versus Bone Ceramic para elevação bilateral de seio maxilar no mesmo paciente: avaliação histológica qualitativa após seis meses / Bio-Oss versus Bone Ceramic in sinus floor elevation procedures in the same patient: qualitative histological evaluation after six months

O objetivo do presente caso clínico foi avaliar histologicamente o comportamento do Bio-Oss e do Bone Ceramic, utilizados separadamente, para elevação bilateral dos seios maxilares de um paciente com 49 anos, do sexo feminino, que procurou a Escola de Odontologia de Cuiabá/MT para reabilitação implantossuportada. Após bloqueios anestésicos adequados, foi realizada em cada hemimaxila a incisão tecidual com lâmina de bisturi de número 15. Para acesso ao rebordo maxilar atrófico, foi feito o descolamento do retalho total utilizando o descolador de Molt. Posteriormente, no rebordo maxilar atrófico, foi confeccionada uma janela lateral utilizando-se broca esférica diamantada. A parede anterior do seio foi ostectomizada, a membrana sinusal foi deslocada e elevada, sem qualquer perfuração. Subsequentemente, foram realizadas as inserções dos biomateriais: Bio-Oss (lado direito) e Bone Ceramic (lado esquerdo), por um único cirurgião-dentista. Após seis meses, foram obtidas biópsias bilaterais que foram processadas para inclusão em parafina. Cortes foram corados com hematoxilina e eosina para análise histológica qualitativa. Os achados histológicos deste caso clínico confirmam as propriedades osteocondutivas dos biomateriais investigados, visto que foram observados íntimos contatos entre o Bio-Oss ou o Bone Ceramic e o tecido ósseo neoformado. Porém, parece haver uma maior presença de tecido ósseo neoformado ao redor do Bio-Oss. Além disso, ao redor do Bone Ceramic, maior quantidade de células inflamatórias é observada. Apesar dos resultados indicarem ligeira superioridade do Bio-Oss, estudos envolvendo um maior número de pacientes devem ser realizados, a fim de confirmar os achados deste caso clínico.

The aim of this case report was to evaluate from the histologic aspect the behavior of Bio-Oss and Bone Ceramic for bilateral maxillary sinus elevation in a 49 years-old female patient. After adequate anesthesia, an incision was placed with a scalpel blade and the mucoperiosteal flap was elevated. Then, a lateral window was made with a round diamond bur. An osteotomy was placed in the anterior sinus wall, the sinus membrane was dislocated without perforation. After, Bio-Oss (right side) and Bone Ceramic (left side) were packed by the same surgeon. Six months later, biopsies were obtained and processed with H&E staining. The histological findings confirmed osteoconductive properties of both materials with close contact at the newly formed bone. However, more bone tissue seems to be available around Bio-Oss. Besides, more inflammation was seen around Bone Ceramic. Although the results indicate a slight superiority for Bio-Oss, more studies with a great sample size are necessary to corroborate the findings of this clinical report.

Deslizamento de retalho palatino: visão estética / The palatal sliding flap: an aesthetic view

A relação implante/estética está se tornando cada vez mais desafiadora, pois para uma prótese adequada, devemos conhecer e imitar forma e contorno do dente adjacente, papila interdental, zênite gengival, dentre outros. Pensando nesta combinação, os autores propuseram, neste trabalho, uma técnica modificada visando oferecer um prognóstico estético favorável. As técnicas utilizadas foram a de preenchimento alveolar com osso liofilizado bovino pós-exodontia e deslizamento de retalho palatino modificado no fechamento da ferida alveolar. O objetivo desta associação de técnicas é a manutenção do rebordo para diminuição da perda de crista óssea e/ou parede vestibular, manutenção do arcabouço alveolar quando existem defeitos estabelecidos, fechamento por primeira intenção da ferida cirúrgica e ganho de tecido gengival para a reorganização de papila interdental e zênite gengival evitando, assim, a necessidade de um segundo momento cirúrgico na manipulação de tecido mole para ganho estético. Os resultados são provenientes da prática clínica, porém, de extrema satisfação.

The relationship between aesthetics and implants is becoming more and more important. It is imperative that we know about the restored tooth’s planned shape and contour to have an appropriate prosthesis with adequate interdental papillae and gingival margins. In this paper, the authors propose a modified extraction closure procedure attempting to offer a favorable aesthetic prognosis for the final implant. We used two different alveolar preservation techniques with freeze-dried bone after tooth extraction and a modified palatal rotation flap for soft tissue coverage. The aim was to keep buccal and alveolar crest bone loss to a minimum and to have closure and healing by primary intention. The procedure was designed to enhance soft tissue reorganization of the interdental papillae and marginal gingival tissue. Using these combined techniques, there is no need to gain soft tissue in a second surgical procedure. The results are variable, but extreme satisfactory.

Acompanhamento histomorfométrico e radiográfico do reparo de defeito crítico em crânio de ratos preenchidos com associação de osso medular bovino e BMP / Histomorphometric and radiographic monitoring the repair of critical defects in skulls of rats completed with combination of medular bovine bone plus BMP

O objetivo deste trabalho foi avaliar histomorfometricamente o processo de reparo de defeito ósseo perene na calvária de ratos preenchidos com grânulos de osso medular bovino desproteinizado, associado a um pool de proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) bovinas. Após 1, 3 e 6 meses, as calotas cranianas foram coletadas, processadas e as sessões obtidas coradas em Hematoxilina e Eosina. A análise histomorfométrica mostrou que o xenoenxerto não foi completamente degradado durante os períodos estudados, com a densidade de volume do material implantado permanecendo próximo de 50% em todos os períodos (p > 0,05). No grupo controle a densidade de volume do tecido conjuntivo era de 62,5% ± 8,81% (1° mês), diminuindo significantemente para 40,2% ± 7,5% após 6 meses (p < 0,05), enquanto que o volume de tecido ósseo neoformado passou de 37,5% ± 8,81% no 1° mês para 59,8% ± 7,5% aos 6 meses (p < 0.05). No grupo experimental, o volume de tecido conjuntivo diminuiu de 45,8% ± 7,8% (1° mês) para 31,8% ± 8,38% (6° mês), ao passo que o volume do tecido ósseo neoformado aumentou de 7,0% ± 2,45% (1° mês) para 19,6% ± 11,04% (6° mês) (p < 0,05). Conclui-se que, a despeito da biocompatibilidade e propriedade osteocondutora do xenoenxerto, o composto estudado retardou o reparo ósseo em defeito críticos no crânio de ratos.

The objective of this study was to evaluate the healing process of perennial bone defect in the skull of rats promoted by treating the defects with inorganic granules of bovine bone plus a pool of bone morphogenetic proteins (BMPs). After 1, 3 and 6 months from surgery, the whole skulls were carefully collected and sections obtained were stained with Hematoxylin & Eosin. We showed that implanted material was not completely resorbed during the periods studied, remaining around 50% in all periods (p > 0.05). In the control group the volume of connective tissue decreased significantly from 62.5% ± 8.81% (1 month) to 40.2% ± 7.5% after 6 months (p < 0.05), while that the amount of neoformed bone increased from 37.5% to ± 8.81% (1 month) to 59.8% ± 7.5% (6 months) (p < 0.05). On the other hand, in the experimental group, the volume of connective tissue decreased from 45.8% ± 7.8% (1 month) to 31.8% ± 8.38% (6 months), while the amount of neoformed bone tissue increased from 7.0% ± 2.45% (1 month) to 19.6% ± 11.04% (6 months) (p < 0.05). Based on results, we concluded that, despite the biocompatibility and osteoconductive property of signaling molecules such as BMPs, their combination with bovine bone particles delayed the new bone formation in critical defects rats.

Resposta tecidual ao enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino: avaliação histomorfológica e histomorfométrica / Tissue response to inorganic bovine bone xenograft: histomorphological and histomorphometrical evaluation

Proposição: Avaliar a resposta tecidual ao enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino, por meio de análise histomorfológica e histomorfométrica. Material e método: O enxerto foi obtido da costela de boi resfriada após 8 horas de sacrifício do animal e processado da seguinte maneira: imersão por 60 minutos em água oxigenada a temperatura ambiente, com trocas a cada 15 minutos; imersão em água oxigenada aquecida, a uma temperatura de 100ºC, por 30 segundos e resfriamento imediato com água destilada a uma temperatura variando de 6º a 8ºC; enxague em água destilada corrente por 6 horas; imersão em álcool 70º, 90º e 100º, respectivamente, sendo 15 minutos em cada álcool; esterilização em autoclave. Em seguida, 10 coelhos brancos (Nova Zelândia) foram utilizados, originando dois grupos: Grupo I – enxerto inserido no pavilhão auricular e Grupo II – enxerto inserido e fixado em tíbia. Decorridos 180 dias, foi realizado sacrifício dos animais por injeção excessiva de anestésico. Resultados: No Grupo I, o enxerto apresentou-se em íntimo contato com tecido subcutâneo. No Grupo II, o enxerto apresentou-se em justaposição com o leito ósseo receptor. E nos dois grupos havia espaços medulares preenchidos por medula óssea ativa e osso neoformado, além da ausência de osteócitos no osso bovino e presença destas células no osso neoformado, próximo aos espaços medulares. Conclusão: Em razão dos resultados obtidos o enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino demonstrou biocompatibilidade, capacidade osteocondutora e discreta perda de volume, preenchendo requisitos importantes do material ideal para reconstrução óssea.

Objective: To evaluate tissue response to inorganic bovine bone xenograft by histomorphological and histomorphometrical analyses. Material and methods: The bone grafts was obtained from cooled bovine rib 8 hours after slaughtering and were processed as follows: 60-minute immersion in hydrogen peroxide at room temperature, with changes at 15-minute intervals; 30-second immersion in hydrogen peroxide at 100ºC; immediate cooling with distilled water at temperatures ranging from 6º to 8ºC; rinsing in running distilled water for 6 hours; immersion in alcohol grades of 70º, 90º and 100ºGL (15-minute in each solution); autoclaving. Thereafter, 10 white New Zealand rabbits were distributed into two groups: Group I – graft inserted in the ear pavilion and Group II – graft inserted and fixed in the tibia. After 180 days, the animals were sacrificed by anesthetic overdose. Results: In Group I, the graft was in intimate contact with the subcutaneous tissue, while in Group II the graft was juxtaposed to the recipient site. Both groups presented medullar spaces filled with active bone marrow and newly formed bone. In addition, osteocytes were absent in the bovine bone graft and present in the newly formed bone, close to the medullar spaces. Conclusion: From the obtained results, the inorganic bovine bone xenograft showed biocompatibility.

Resposta tecidual ao enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino: avaliação histomorfológica e histomorfométrica / Tissue response to inorganic bovine bone xenograft: histomorphological and histomorphometrical evaluation

Proposição: Avaliar a resposta tecidual ao enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino, por meio de análise histomorfológica e histomorfométrica. Material e método: O enxerto foi obtido da costela de boi resfriada após 8 horas de sacrifício do animal e processado da seguinte maneira: imersão por 60 minutos em água oxigenada a temperatura ambiente, com trocas a cada 15 minutos; imersão em água oxigenada aquecida, a uma temperatura de 100ºC, por 30 segundos e resfriamento imediato com água destilada a uma temperatura variando de 6º a 8ºC; enxague em água destilada corrente por 6 horas; imersão em álcool 70º, 90º e 100º, respectivamente, sendo 15 minutos em cada álcool; esterilização em autoclave. Em seguida, 10 coelhos brancos (Nova Zelândia) foram utilizados, originando dois grupos: Grupo I – enxerto inserido no pavilhão auricular e Grupo II – enxerto inserido e fixado em tíbia. Decorridos 180 dias, foi realizado sacrifício dos animais por injeção excessiva de anestésico. Resultados: No Grupo I, o enxerto apresentou-se em íntimo contato com tecido subcutâneo. No Grupo II, o enxerto apresentou-se em justaposição com o leito ósseo receptor. E nos dois grupos havia espaços medulares preenchidos por medula óssea ativa e osso neoformado, além da ausência de osteócitos no osso bovino e presença destas células no osso neoformado, próximo aos espaços medulares. Conclusão: Em razão dos resultados obtidos o enxerto xenógeno inorgânico de osso bovino demonstrou biocompatibilidade, capacidade osteocondutora e discreta perda de volume, preenchendo requisitos importantes do material ideal para reconstrução óssea

Objective: To evaluate tissue response to inorganic bovine bone xenograft by histomorphological and histomorphometrical analyses. Material and methods: The bone grafts was obtained from cooled bovine rib 8 hours after slaughtering and were processed as follows: 60-minute immersion in hydrogen peroxide at room temperature, with changes at 15-minute intervals; 30-second immersion in hydrogen peroxide at 100ºC; immediate cooling with distilled water at temperatures ranging from 6º to 8ºC; rinsing in running distilled water for 6 hours; immersion in alcohol grades of 70º, 90º and 100ºGL (15-minute in each solution); autoclaving. Thereafter, 10 white New Zealand rabbits were distributed into two groups: Group I – graft inserted in the ear pavilion and Group II – graft inserted and fixed in the tibia. After 180 days, the animals were sacrificed by anesthetic overdose. Results: In Group I, the graft was in intimate contact with the subcutaneous tissue, while in Group II the graft was juxtaposed to the recipient site. Both groups presented medullar spaces filled with active bone marrow and newly formed bone. In addition, osteocytes were absent in the bovine bone graft and present in the newly formed bone, close to the medullar spaces. Conclusion: From the obtained results, the inorganic bovine bone xenograft showed biocompatibility

Aspectos clínicos e radiográficos do pericárdio bovino como substituto do ligamento cruzado cranial de cães / Clinical and radiographic aspects of the bovine pericardium as a substitute of the canine cranial cruciate ligament

Avaliaram-se os aspectos clínicos e radiográficos do enxerto de pericárdio bovino, preservado em glicerina, como substituto do ligamento cruzado cranial. Quinze cães machos, sem raça definida, pesando entre 17,4 e 31,6 kg, foram submetidos à ruptura experimental do ligamento cruzado cranial e à substituição por pericárdio, via videoartroscopia. Os cães foram divididos em três grupos de cinco e avaliados aos 30, 90 e 120 dias. O membro operado foi imobilizado por duas semanas e procederam-se avaliações clínicas semanais. Radiografias foram feitas mensalmente e foram realizadas colheita de líquido sinovial nos tempos descritos. Clinicamente, os cães mostraram claudicação acentuada a moderada, hipotrofia muscular no membro operado e acentuado deslocamento cranial da tíbia em relação ao fêmur. As alterações degenerativas foram observadas nas radiografias. Observou-se instabilidade acentuada em todos os animais. O líquido sinovial tinha características de inflamação. Concluiu-se que o enxerto rompeu precocemente, provocou reação inflamatória persistente e fenômenos de rejeição, não sendo, portanto, recomendado para substituição do ligamento cruzado cranial de cães

The clinical and radiographic aspects of the bovine pericardium preserved in glicerin, were evaluated as a substitute for canine cranial cruciate ligament. Fifteen male mongrel dogs weighing between 17.4 and 31.6kg had the ligament experimentally ruptured and the stifle joint stabilized by an arthroscopical technique with bovine pericardium as a graft. The dogs were divided into three groups of five animals each. They were evaluated at 30, 90 and 120 days. The operated limb was imobillized for two weeks and clinical examination was performed weekly. Radiographs were taken monthly and the sinovial fluid was collect at 30, 90 and 120 days. Clinically, dogs presented high to moderate lameness, muscle hipotrophy in the operated limb and accentuated cranial drawer movement. Degenerative disease was detected in radiography. All dogs showed total rupture of the graft. Sinovial fluid analysis showed characteristics of inflammation. It can be concluded that pericardium graft failed prematurely, incited persistent inflammatory reaction and rejection phenomena. Thus, it cannot be recommended as a xenograft for cranial cruciate ligament replacement

Avaliação da resposta tecidual ao implante de osso bovino misto medular em subcutâneo de ratos / Evaluation of tissue repair, in case of bovine bone implantation mixed with bone marrow graft, in subcutaneous region of rats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta tecidual ao implante do osso bovino misto (OBM) acelular em subcutâneo de ratos. Blocos de OBM (10x10x5mm) foram implantados no tecido subcutâneo de 25 ratos machos Wistar, os quais foram mortos após 3, 7, 14, 30 e 60 dias (n = 5/período) da cirurgia. O tecido reacional foi coletado, fixado em formol 10% tamponado, lavado, desidratado, diafanizado em xilol e incluído em parafina. Cortes com 6µm de espessura foram corados com Hematoxilina e Eosina. A análise microscópica subjetiva indicou que o OBM foi circundado por tecido de granulação (composto de células mononucleares semelhantes a fibroblastos e polimorfonucleares) aos 3 dias. Entre 7 e 30 dias observou-se a invasão gradual dos poros do material implantado pelo tecido de granulação apresentando um discreto infiltrado inflamatório mononuclear com poucas células gigantes multinucleadas (CGM). Concomitantemente à angiogênese observa-se aparecimento de adipócitos no interior do material confirmando porosidade interconectada dos poros. Após 60 dias os espaços medulares estavam completamente ocupados por tecido de granulação composto por células semelhantes a fibroblastos e raras células inflamatórias mononucleares e CGM. Não se observou indícios de degradação ou absorção do material até o período de 60 dias. Considerando a ausência de necrose ou outros sinais de destruição tecidual, a presença de proliferação celular e angiogênese para o interior do material e que não se observou absorção do material, concluiu-se que o OBM é biocompatível e não absorvível, tendo potencial aplicação na engenharia de tecidos.

The aim of this study was to evaluate the tissue response to acellular mixed bovine bone graft (MBG) implanted in the subcutaneous tissue of rats. MBG in block (10x10x5mm) was implanted in 25 adult male Wistar rats, killed 3, 7, 14, 30 e 60 days after surgery (n=5/period). The granulation tissue was fixed in 10% buffered formalin, washed, dehydrated in ethanol, diafanized in xylene, and included in paraffin according to standard technique. Histological sections measuring 6µm in thickness were stained with haematoxylin and eosin. Histological analysis 3 days after surgery showed a granulation tissue around the MGB block presenting mononuclear cells like fibroblasts and neutrophils. From 7 to 30 days, chronic inflammatory infiltrate consisting mainly of macrophages and few infl ammatory multinucleated giant cells (MGC) were observed invading the porous of MGB. Parallel to angiogenesis, adipocytes were present in the interior of material, corroborating the presence of interconnected porous. After 60 days, medullar spaces were fulfilled with granulation tissue presenting fibroblast-like cells and rare mononuclear inflammatory cells and MGC. No signs of material degradation or absorption were noted throughout the experimental periods. Considering the absence of necrosis or other signs of tissue destruction, cell growth and angiogenesis inside the material and the absence of material absorption, it was concluded that MGB was biocompatible and non absorbable being potentially adequate for tissue engineering.